尿液培養Urine Culture

一、題目：尿液培養Urine Culture

二、原理及目的：

尿道感染是指尿道遠端和腎臟間的微生物感染。一般尿液的收集方法有清潔中段排尿(Clean-catch midstream voided urine)、導尿檢體(Catheterized specimens)，膀胱鏡檢之檢體(Cystoscopy specimens)及恥骨上方穿刺抽取之檢體(Suprapubic aspiration specimens)，其中以清潔中段排尿為最常用之方法。

當懷疑尿道感染(Urinary tract infection)時，以定量方法檢查尿中細菌數目和種類，對診斷和治療上很有幫助。

三、材料及方法：

1.材料：

寬口、有蓋之無菌集尿瓶。
血液瓊脂平板 (BAP , Blood agar plate) 。
EMB瓊脂平板(Eosin methylene-blue agar)。
白金定量接種環(4mm)每環之量0.001ml。

2.方法：

收集尿檢體之時機，最好是早晨第一次小便檢體，因為如有細菌，細菌在膀胱內過夜孵育可以生長，此時數目最多。
開始排出前段小便約20~30ml，此段小便不要，解在馬桶中，不要讓尿流中斷，就直接將中段尿液以無菌塑膠容器收集，大約收集10~15ml左右，手指不要碰到容器口。
收集好後，立刻蓋上蓋子，貼上標籤註明組別，如不立即接種，應將檢體置於冰箱。
接種前，先輕輕旋轉容器，使尿液混合均勻，避免氣泡產生。
以標準定量白金環(每圈環量0.001ml)取一接種環量之尿液接種於血液瓊脂平板上，注意須先將白金接種環用火焰滅菌，待冷卻後，以垂直方向持拿接種環，使圓圈部份剛好浸入尿液中，如此所取之量方準確，接種方法如下：

- 先垂直劃1或2道。
- 接著再緊密持續塗劃整個平板，使細菌塗散開來。

另用白金接種環，取E-coli依上述2步驟之方法接種於EMB平板上，用以學習計算細菌濃度。
接種環以火焰滅菌，置回試管架上。
血液瓊脂平板及伊紅美藍平板置37℃溫箱培養18~24小時，觀察結果。

四、結果：

計算平板上菌落數，每個菌落代表每ml檢體中有10³個微生物。

經計算得450個菌落，即每ml有4.5×10⁵個微生物。

五、討論：

若長在BAP上的菌落少於10個，也有可能是汙染的情形，臨床上即不必鑑定也不宓做藥物感受性試驗，直接報告每ml尿液的菌數。若無細菌生長，即報告每ml尿液少於10³。

若生長的菌落數為10~100，即報告每ml尿的菌數，這種每ml有10⁴~10⁵細菌的檢體，一般表示檢體收集不當，或為可疑者，應重取尿液再培養。

若菌落數有100個以上，就報告每ml細菌超過10⁵，此時即表示有感染，實驗室應加以鑑定細菌種類和做藥物感受性試驗。

由於收集尿液時，很容易被手、衣物、或尿道口附近之細菌所汙染，因此，清洗為必要步驟：

(1)男性：

- 於洗手間，先以肥皂及清水徹底清洗雙手，抖落過剩的水，或以清潔紙巾揩乾。
- 將陰莖露出，使包皮完全退翻露出龜頭，以一塊浸泡肥皂水之紗布洗淨龜頭，再用一塊肥皂水紗布反擦洗後，以無菌鹽水(或蒸餾水)沖掉殘餘的肥皂。
- 另取一塊無菌乾紗布，將尿道口水分擦乾，龜頭清洗後，即可開始排尿。
- 接取中段尿液。
(2)女性：

- 以手指將陰唇分開，再以沾有藥皂或肥皂之紗布清潔，然後以清水沖洗尿道口周圍，擦乾並排出前段尿液。
- 取一40ml無菌塑膠杯接取中段尿。

尿液的微生物檢查如果可能，僅量操作革蘭氏抹片染色，以新鮮不離心的尿液做成抹片，在空氣中乾燥，經熱固定，再進行革蘭氏染色，在幾個油鏡視野下，發現一或以上細菌存在，即表示抹片標本為陽性，如用10⁵/ml細菌數代表有意義，其與直接塗抹片間的相關性高達75﹪~95﹪。

而從婦女收集的尿液檢體，則應儘量避免使用導尿管，因為導尿管的使用，常併發尿道感染，不可不慎，然而某些病人必須使用導尿管收集，則必須在短時間內換新。

另外，值得注意的是，雖然厭氧菌有時引起尿道感染，但中段尿液絕對不要進行厭氧菌培養，因為尿道含有常在厭氧菌，如檢驗將不正確。如果懷疑病人有厭氧菌感染時，必須使用穿刺法(percutaneous suprapubic bladder aspiration)或用nephrostomy tube 收集。

茲將尿液檢體菌落數與檢驗室操作關係列表如下：

檢體來源	菌落數×10³	操作法
一般清潔排尿(Clean catch)	50以下	僅報告菌落數，及革蘭氏染色特徵
	50~100	Pure culture進行鑑定及感受性
	100以上	生長量"3+"摸的菌需進行鑑定及感受性
導尿(Catherter)	1以上	若長3種以內進行鑑定及感受性
恥骨穿刺及透析(Suprapubic)	任意數目(<10³亦然)	所有微生物皆需進行鑑定及感受性

經過鑑定，我們可以發現引起尿道感染的常見病原菌。因為從腎臟分泌出來的尿在正常情況下是無菌的，若尿中有微生物存在(即菌尿症bacteriuria)除非遭到汙染，否則即屬不正常。為此，我們需要定量以判斷是否與菌尿症有關。常在菌群包括α-鏈球菌，腸球菌，除了淋病雙球菌以外的奈瑟氏菌，除了肺結核分枝桿菌外之其他分枝桿菌，厭氧菌之擬桿菌，一些腸桿菌科菌種。

當然，我們除了藉尿液培養來檢驗，也可以從臨床症狀上來觀察。患者常有發燒、急尿、頻尿、小便困難或恥骨上厭痛等症狀；而一歲以下之嬰兒患者常具有發燒、體溫過低、呼吸中止、心跳徐緩、小便困難、倦怠或嘔吐等症狀。如有上述情形，可能是受到了尿道感染。尿道感染患者有可能在尿道形成尿道炎(urethritis)，前列腺形成前列腺炎(prostatitis)、膀胱形成膀胱炎(cystitis)或在腎臟形成腎盂腎炎(pyelonephritis)。

六、參考文獻：

丁明哲、周啟馥(民82)‧醫用微生物學實驗指導‧台北市：藝軒、

黃啟嘉(1991)‧醫用微生物學(上冊)‧台北市：合記。

蔡文城(民82)‧醫師用臨床微生物學‧台北市：九州圖書文物。