一、題目：ELISA

二、原理及目的：

酵素連結免疫分析法已日益普及，因為非常靈敏且不必如免疫螢光術和放射免疫分析法需要特殊設備。此法的原理是以一種酵素連結到抗原或抗體上，用酵素活性來做為定量標記。有許多方法已經架構完成，視使用的酵素性質及待測的抗原-抗體系統而定。其中廣泛使用的便是酵素連結免疫吸附分析法（enzyme-linked immunosorbent assay；ELISA），可以測定抗原或抗體。

ELISA適用於許多病毒的診斷及確認。

三、材料及方法：

1.材料：（Solid-phase）

• Paper.
• Plastic/glass beads
• Latex emulsions.
• Microtiter plate wells.
• 測試抗體。
• 配位體（可偵測抗體且能共價結合至酵素上之分子）。
• 發色劑（一種無色的物質，但經配體上的酵素作用後會變為有色的終產物）。

2.方法：（如圖所示）

四、結果：

1.Antibody sandwich immunoassay（測Ag）：

2.Indirect antibody capture immunoassay（測Ab）：

五、討論：

ELISA是在1971年首次由Engvall和Perlman所介紹。

不論是測抗原或抗體都有很高的敏感性及專一性，且使用設備相較之下少了許多。固相吸附准許unbound reagents快速且完全地清洗。是一種安全又穩定的方法。

若要測定抗原，則以一已知特定抗體結到固相之上，含有抗原之待測物加入後，沖洗掉多餘部分，再加入第二種有酵素標記的抗體。此試驗中的抗原至少要有二個決定部位。洗去第二種抗體後，加入基質，用色度計估計酵素活性，此濃度與抗原濃度有關。

偵測Ag的方法有兩種：Antibody sandwich immunoassay（即加入Ab再加Ag最後是Ab）及Antibody capture immunoassay（Competition assay）。我們要談的是抗體三明治免疫分析法：首先是Ag專一性的primary Ab的吸附到塑膠盤，此時洞被高濃度的非專一性蛋白所填充（Bovine serum albumin, gelatin, skim milk, or gamma-globulin）。接著加入樣本抗原；那些沒有接合到primary Ab的都被沖到了。最後則是加入有酵素標定的secondary Ab，再洗掉多餘的受標定抗體。留下的受標定抗體被額外的酵素受質所加入，然後我們用1N的H₂SO₄來終止反應。（上述實驗的沖洗液為Tween 20）。

若要測定抗體，則使已知特定抗原固結於某種固相（如塑膠杯或microplate），與待測液血清的稀釋液一起靜置。加進某種特定受質，即可測出酵素活性；變色反應可用色度計（colorimetry）來估計。酵素反應是結合抗原的抗體量的直接函數。包括有Antigen capture immunoasssay和Indirect antibody capture immunoassay.

ELISA在臨床診斷學上的應用包括：德國麻疹抗體之測定；CMV，HSV，measles，mumps，VZV等病毒抗體測定。HIV抗體測定（Rapid ELAVIA，SERODIA-HIV）及C型肝炎病毒抗體測定（C型肝炎病毒亦可用PCR來測定）。

最後就是判讀結果，在SERODIA-HIV中，紅色顆粒凝聚成一個小紅點沉落盤底，上清液為透明狀即為陰性。若紅色顆粒均勻散布於溶液之中，不會聚集成一紅點，呈混濁狀，即為陽性。若介於中間須重做，再次得同樣結果則要用西方點墨法來做確認。

六、參考文獻：

Jacquelyn G. Black (1993).Microbiology principles and Applications.(2版).Prentice hall, Inc.

王聖予、李麗俐等譯（民85）•免疫學（4版）•台北市：藝軒。

呂玉華（民76）•微生物學•台北市：合記。

李國鏞博士編著（民81）•普通微生物學•台北市：九州。

許秉寧編譯、蔡惠芳協譯（民78）•醫用生物學上冊（17版）•台北市：南山堂。